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食用菌實用制種技術

畜牧家禽網(wǎng)  來源:中國食品科技網(wǎng) 閱讀數(shù):

  隨著食用菌產(chǎn)業(yè)的蓬勃發(fā)展,菌種需要量隨之增加,而現(xiàn)有菌種生產(chǎn)單位明顯偏少,許多菇農(nóng)不得不向外引種。長途購運菌種不僅花費大,成本高而且菌種因破瓶而易引起雜菌污染,從而嚴重影響栽培食用菌的經(jīng)濟效益。菇農(nóng)若能掌握菌種生產(chǎn)程序和制種技術,實行自行制種,逐步發(fā)展成制種專業(yè)戶,也是一項很好的致富門路。 菌種生產(chǎn)程序,通常分為母種、原種和栽培種3個層次,也就是通常所說的一級、二級、三級菌種。其中母種的分離選育技術性強,要求精化;而原種和栽培種的制作則比較簡單。下面介紹各級菌種的制作技術。

  一、母種的分離選育 母種主要采用人工選擇、誘變育種、雜交育種和原生質融合等手段獲得。作為一般制種專業(yè)戶,可以采用人工選擇方式分離培育母種,具體步驟與操作方法如下。

  1、采集種源 從野生成人工栽培群體中,選擇有代表性的優(yōu)良菇體作為種源。種菇的標準是:八成熟,朵形圓正、肉質肥厚,無病蟲害。采集1--2朵符合上述標準的種菇編上號碼,作為分離母種的材料。從栽培室采集的應標有原菌株代號。

  2、培養(yǎng)基配制 瓊脂培養(yǎng)基又叫PDA培養(yǎng)基,常用配方為:馬鈴薯200--250克,瓊脂15--20克,葡萄糖20--25克,清水1000毫升。也可以加硫酸鎂1--1.5克,維生素B1微量,磷酸二氫鉀2--3克。先將馬鈴薯洗凈去皮,切成薄片,置于鋁鍋內加水煮沸30分鐘,撈起后用4層紗布過濾,取汁。然后將瓊脂加入汁內,邊加熱邊攪拌,讓瓊脂充分溶化;再將葡萄糖等加入,稍煮幾分鐘后,同樣用4層紗布過濾,取其汁液。將汁液趁熱裝入玻璃試管內。裝至管長的1/5,管口用棉花塞緊,或將汁液裝入玻璃三角瓶內,裝量20毫升。然后置于高壓鍋內,在98--108千帕/厘米的壓力下。隨著食用菌產(chǎn)業(yè)的蓬勃發(fā)展,菌種需要量隨之增加,而現(xiàn)有菌種生產(chǎn)單位明顯偏少,許多菇農(nóng)不得不向外引種。長途購運菌種不僅花費大,成本高而且菌種因破瓶而易引起雜菌污染,從而嚴重影響栽培食用菌的經(jīng)濟效益。菇農(nóng)若能掌握菌種生產(chǎn)程序和制種技術,實行自行制種,逐步發(fā)展成制種專業(yè)戶,也是一項很好的致富門路。 菌種生產(chǎn)程序,通常分為母種、原種和栽培種3個層次,也就是通常所說的一級、二級、三級菌種。其中母種的分離選育技術性強,要求精化;而原種和栽培種的制作則比較簡單。下面介紹各級菌種的制作技術。

  一、母種的分離選育 母種主要采用人工選擇、誘變育種、雜交育種和原生質融合等手段獲得。作為一般制種專業(yè)戶,可以采用人工選擇方式分離培育母種,具體步驟與操作方法如下。

  1、采集種源 從野生成人工栽培群體中,選擇有代表性的優(yōu)良菇體作為種源。種菇的標準是:八成熟,朵形圓正、肉質肥厚,無病蟲害。采集1--2朵符合上述標準的種菇編上號碼,作為分離母種的材料。從栽培室采集的應標有原菌株代號。

  2、培養(yǎng)基配制 瓊脂培養(yǎng)基又叫PDA培養(yǎng)基,常用配方為:馬鈴薯200--250克,瓊脂15--20克,葡萄糖20--25克,清水1000毫升。也可以加硫酸鎂1--1.5克,維生素B1微量,磷酸二氫鉀2--3克。先將馬鈴薯洗凈去皮,切成薄片,置于鋁鍋內加水煮沸30分鐘,撈起后用4層紗布過濾,取汁。然后將瓊脂加入汁內,邊加熱邊攪拌,讓瓊脂充分溶化;再將葡萄糖等加入,稍煮幾分鐘后,同樣用4層紗布過濾,取其汁液。將汁液趁熱裝入玻璃試管內。裝至管長的1/5,管口用棉花塞緊,或將汁液裝入玻璃三角瓶內,裝量20毫升。然后置于高壓鍋內,在98--108千帕/厘米的壓力下滅菌30分鐘左右。滅菌后及時取出,趁熱將試管斜排于桌上,冷卻后即成為固體斜面培養(yǎng)基。

  3、母種分離方法 有孢子彈射、組織分離和基內分離3種方法。①孢子彈射法。將種菇表面消毒,吸干水分后,將菇體懸掛于裝有瓊脂培養(yǎng)基的三角瓶內,讓菇體內的袍子自然散落在培養(yǎng)基上萌發(fā)菌絲。也可以剪取一小決菇體,貼附在試管斜面培養(yǎng)基表面,讓孢子散落在培養(yǎng)基上萌發(fā)菌絲,即能獲得母種;③組織分離法。將消毒過的種菇,在接種箱內用手從菇柄處對半解開,或用刀片切開,使菇體形成對開。在菌蓋和菌柄交界處或菌褶處,用接種刀切取一小塊菇體,然后縱切成5毫米x10毫米的小薄片,用接種針挑取一塊薄片,接入斜面培養(yǎng)基的中央,每支試管接種一小決薄片,待其萌發(fā)菌絲,即可得到母種;(3)基內分離法。選擇已長菇的木段,削去樹皮及表層木質部,用70%的酒精消毒后,鋸成1厘米厚的薄片,放入0.1%的升汞水中消毒1--2分鐘,再用滅菌水洗去殘液。然后再將小薄片劈成0.5--1厘米寬的小條,接入斜面培養(yǎng)基中央,待長出菌絲后即得母種。也可以在已長菇的菌袋中,經(jīng)消毒處理后,用接種針鉤取袋內色澤純、長勢旺的菌絲體,接種在試管斜面培養(yǎng)基中央,待萌發(fā)菌絲后,同樣獲得菌種。

  4、適溫培養(yǎng) 通過上述不同方式將菌種分離接種于試管后,要及時將試管移入已消毒的培養(yǎng)箱或培養(yǎng)室內培養(yǎng),溫度控制在25℃左右,使分離獲得的孢子或菌絲在適溫下發(fā)育。一般孢子彈射3--4天后孢子萌發(fā)成菌落,10天后菌絲長滿管;組織分離接種后2--3天,菌絲即萌發(fā),并在培養(yǎng)基上蔓延生長;菇木分離接種后,7天菌絲即恢復生長。

  5、選育提純 通過上述方法得到的菌絲,不一定都是優(yōu)質的,還需要選育提純。因此,在菌絲萌發(fā)后,要認真觀察,挑選色澤純、健壯、長勢正常、無間斷的菌絲,在接種箱內連同培養(yǎng)基鉤取菌絲,接入另備的試管培養(yǎng)基上。在23--25℃的恒溫條件下,培養(yǎng)7--10天,待菌絲長滿管后,再進行觀察,從中擇優(yōu)取用,即為“母代”母種。

  6、轉管擴接 母代母種可以轉管擴接成“子代”母種。采用同樣的斜面培養(yǎng)基,每支可擴接30--50支子代母種。生產(chǎn)上供應的多為子代母種。它可以再次轉管擴接。一般每支可擴接成20--25支子代母種,但轉管次數(shù)不得超過5次。

  7、出菇試驗 分離選育的母種,還必須進行出菇試驗。方法是:把母種接種于瓶或袋裝的木屑培養(yǎng)基上,根據(jù)各種菇耳種性對溫度的要求,進行適溫培養(yǎng),直至出菇才證實可用于生產(chǎn)。

  二、原種繁殖培養(yǎng) 將母種接在瓶或袋的木屑培養(yǎng)基上,通過培養(yǎng),即成原種。其技術要求如下。

  1、原種木屑培養(yǎng)基配方 雜木屑77.5%,麥麩20%,蔗糖1%,石膏粉1.2%,硫酸鎂0.3%。pH值(滅菌前)6.5--7,含水量調至60%。將上述原、輔料混合拌勻,裝入750毫升的玻璃菌種瓶內,裝料要求下松上緊。瓶口塞緊棉花,再用牛皮紙包住瓶頸與棉塞。然后置于高壓滅菌鍋內,在147千帕/平方厘米壓力下滅菌2--2.5小時。也可進行常壓滅菌,在100℃下保持10--11小時,達標后趁熱取出,讓其冷卻。

  2、接入菌種 待料溫降至25℃以下時,在滅菌條件下,將試管種分割成若干決,通過酒精燈火焰迅速接入原種培養(yǎng)基上,每支母種可按4--6瓶原種。

  3、發(fā)菌培養(yǎng) 接種后及時將玻璃菌種瓶移入25℃菌種培養(yǎng)室內進行培養(yǎng)。空間相對濕度控制在70℃以上,避免強光照射。原種培養(yǎng)時間一般菇類需要40--50天,草菇、銀耳只需15--20天即可。

  4、去雜選優(yōu) 原種培育過程中,要每天進行觀察,如發(fā)現(xiàn)有雜菌污染的,應立即淘汰。

  三、栽培種擴大培育 將原種再次擴接在同樣的木屑培養(yǎng)基上,在適溫條件下培養(yǎng)30--35天即為栽培種(又叫生產(chǎn)種),可用于生產(chǎn)栽培。栽培種可用750毫升菌種專用瓶,由于使用量大,所以通常多采用聚丙烯菌種袋。袋的規(guī)格有12厘米x24厘米、15厘米x28厘米、17厘米x33厘米等,可根據(jù)各種菇耳特性和當?shù)亓晳T選擇使用。培養(yǎng)基滅菌采用常壓滅菌灶滅菌,要求滅菌溫度達100℃,保持8--10小時,達標后趁熱卸袋冷卻。待料溫降至25℃以下時,在無菌條件下接入選定品種的原種。每瓶原種可擴接成50--60瓶栽培種。菌種培育室要求干凈,防強光,室溫掌握在23--25℃,并經(jīng)常檢查,發(fā)現(xiàn)雜菌污染應及時淘汰,不斷選優(yōu)去劣。當菌絲長滿袋,尖端菌絲反轉上爬1--3厘米時,為適齡的栽培種。

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