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隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展進(jìn)步，利用羊的繁殖生理原理， 在羊的繁殖過程中采用同期發(fā)情、冷凍精液、超數(shù)排卵與胚胎 移植及早期妊娠診斷等先進(jìn)新技術(shù)，可以加快羊的繁殖和育種工作，大大提高了養(yǎng)羊業(yè)的生產(chǎn)水平和生產(chǎn)能力。

　　一、同期發(fā)情 同期發(fā)情技術(shù)就是利用某些激素人為地控制和調(diào)整母羊自然的發(fā)情周期，使一群母羊中的絕大多數(shù)按計(jì)劃在幾天時(shí)間內(nèi)集中發(fā)情。同期發(fā)情有利于推廣人工授精。特別是在居住分散的山區(qū)，如果能在短時(shí)間內(nèi)使羊群集中發(fā)情，集中進(jìn)行 人工授精就非常便利。同期發(fā)情，集中配種，可以縮短配種季節(jié)，節(jié)省大量的人力物力。同時(shí)又因配種同期化，對(duì)以后的分娩產(chǎn)羔、羊群周轉(zhuǎn)以及商品羊的成批生產(chǎn)等一系列的組織管理帶來方便，適應(yīng)現(xiàn)代集約化生產(chǎn)或工廠化生產(chǎn)的要求。同期發(fā)情有兩種方法：一種方法是促進(jìn)黃體退化，從而降 低孕激素水平；另一種方法是抑制發(fā)情，增加孕激素水平。兩種方法所用的激素性質(zhì)、作用各不相同，但都是改變母羊體內(nèi)孕激素水平，達(dá)到發(fā)情同期化的目的。

　　(一)促進(jìn)黃體退化法 應(yīng)用前列腺素PCF(2a)及其類似物使黃體溶解，從而使黃體期中斷，停止分泌孕酮，再配合使用促性腺激素，引起母羊發(fā)情。用于同期發(fā)情的國產(chǎn)前列腺素F型以及類似物有15甲基PGF(2a)前列烯醇和PCF(la)甲酯等。進(jìn)口的有高效的氯前列 烯醇和氟前列烯醇等。前列腺素的施用方法是直接注入子宮頸或肌肉注射。注入子宮頸的用量為1～2毫克；肌肉注射一般為0．5毫克。應(yīng)用國產(chǎn)的氯前列烯醇(又名80996)時(shí)，在每只母羊頸部肌肉 注射2毫升含0．2毫克的氯前列烯醇，1～5天內(nèi)可獲得90％ 以上的同期發(fā)情率，效果十分顯著。 前列腺素對(duì)處于發(fā)情周期5天以前的新生黃體溶解作用不大，因此前列腺素處理法對(duì)少數(shù)母羊無作用，應(yīng)對(duì)這些無反應(yīng)的羊進(jìn)行第二次處理。還應(yīng)注意，由于前列腺素有溶解黃 體的作用，已懷孕母羊會(huì)因孕激素減少而發(fā)生流產(chǎn)，因此要在確認(rèn)母羊?qū)儆诳諔褧r(shí)才能使用前列腺素處理。

　　(二)孕激素處理法 向待處理的母羊施用孕激素，用外源孕激素繼續(xù)維持黃體分泌孕酮的作用，造成人為的黃體期而達(dá)到發(fā)情同期化。為了提高同期率，孕激素處理停藥后，常配合使用能促使卵泡發(fā)育的孕馬血清(PMSG)?，F(xiàn)在已能人工合成多種制劑的孕酮類似物質(zhì)，主要有甲孕酮(MAP)、甲地孕酮(MA)、氯地孕酮(CAP)、氟孕酮(FGA)、18甲基炔諾酮、16次甲基甲地孕酮(MGA)等。不同種類藥物的用量是：孕酮150～300毫克；甲孕酮40～60毫克；甲地孕酮80～150毫克；氟孕酮30～60毫克；18甲基炔諾酮30～40毫克。這些人工合成的孕激素，其功能與孕酮類似，但其效率往往還大于孕酮，同時(shí)有乳劑、丸劑、粉劑等不同劑型。由于劑型不同，孕激素給藥處理的方法有口服、肌肉注射、皮下埋植和陰道栓塞等。 1．口服孕激素 每日將定量的孕激素藥物拌在飼料內(nèi)，通過母羊采食服用，持續(xù)12～14天，因此每日用藥量除甲孕酮外應(yīng)是前述藥物用量的1/5～17/10，并要求藥物與飼料攪拌均勻，使采食量相對(duì)一致。最后一天口服停藥后，隨即注射孕馬血清400～750國際單位。 2．肌肉注射 一般油劑常用于肌肉注射。每日按一定藥物用量注射到處理羊的皮下或肌肉內(nèi)，持續(xù)10～12天后停藥。這種方法劑量易控制，也較準(zhǔn)確，但需每日操作處理，比較麻煩。國內(nèi)生產(chǎn)的肌注“三合激素”只處理1～3天，大大減少了操作日程，較為方便。 3．陰道栓塞法 將乳劑或其他劑型的孕激素按劑量制成懸浮液，然后用泡沫海綿浸取一定藥液，或用表面敷有硅橡膠，其中包含一定量孕激素制劑的硅橡膠環(huán)構(gòu)成的陰道栓，用尼龍細(xì)線把陰道栓連起來，塞進(jìn)陰道深處子宮頸外口，尼龍細(xì)線的另一端留在陰戶外，以便停藥時(shí)拉出栓塞物。陰道栓一般在14～16天后取出，也可以施以9～12天的短期處理或16～18天的長期處理。但孕激素處理時(shí)間過長，對(duì)受胎率有一定影響。為了提高發(fā)情同期率，在取出栓塞物的當(dāng)天可以肌肉注射孕馬血清400～750國際單位。 4．皮下埋植法 一般丸劑可直接用于皮下埋植，或?qū)⒁欢康脑屑に刂苿┭b入管壁有小孔的塑料細(xì)管中，用專門的埋植器將藥丸或藥管埋在羊耳背皮下，經(jīng)過15天左右取出藥物，同時(shí)注射孕馬血清500～800國際單位。人工合成的孕激素，即外源孕激素作用期太長，將改變母羊生殖道環(huán)境，使受胎率有所降低，因此可以在藥物處理后的第一個(gè)情期過程中不配種，待第二個(gè)發(fā)情期出現(xiàn)時(shí)再實(shí)施配種，這樣既有相當(dāng)高的發(fā)情同期率，受胎率也不會(huì)受影響。

　　二、冷凍精液及其應(yīng)用

　　(一)冷凍精液的原理 常溫或低溫保存的精液，精于仍有代謝作用，所以保存的時(shí)間不會(huì)太長?，F(xiàn)在已能將精液保存溫度降到冰點(diǎn)以下，使精液冷凍起來，完全停止代謝作用，從而使精液保存幾個(gè)月甚至長達(dá)幾十年。冷凍精液保存時(shí)間長，遠(yuǎn)距離運(yùn)輸方便，對(duì)普及人工授精，擴(kuò)大優(yōu)秀公羊的利用率起著非常重要的作用。冷凍精液的冷凍源有兩種：一種是干冰，即固體二氧化碳，其致冷溫度為-78℃。一般用保溫瓶或冰瓶作容器；另一種是液態(tài)氮?dú)?，其致冷溫度達(dá)-196℃，因此必須要用液氮罐貯存。由于精液是在冰點(diǎn)以下的溫度中保存，精子的細(xì)胞液和細(xì)胞質(zhì)可能會(huì)因滲透壓不同而冰點(diǎn)下降度不同。細(xì)胞液和細(xì)胞質(zhì)在通過冰點(diǎn)時(shí)不能同時(shí)凍結(jié)造成精子細(xì)胞成分分離，從而打擊精子活力，形成不可逆的冷休克。冷凍精液的冷打擊溫度為0～-40℃,。為了減少打擊溫度對(duì)精子的傷害，冷凍精液的稀釋液應(yīng)含有甘油保護(hù)成分，其稀釋倍數(shù)、稀釋次數(shù)及稀釋方法均與常溫或低溫保存相同。 科學(xué)家們研究發(fā)現(xiàn)，稀釋液中如果含有甘油，就可避免精子發(fā)生冷休克，順利地通過滴凍過程中的冷打擊溫度。一般甘油含量為稀釋液容量的7％～10％。冷凍精液稀釋多采用“卵黃～檸檬酸鹽一甘油”，或“卵黃～糖一甘油”稀釋液。為減少甘油對(duì)精子的有害作用，先以不含甘油的稀釋液將精液稀釋至最后倍數(shù)的一半，經(jīng)1～2小時(shí)緩慢降溫至5℃，再用含甘油的稀釋液進(jìn)行第二次稀釋。精液經(jīng)過兩次稀釋后，含甘油的稀釋液對(duì)精液起作用需要一定時(shí)間，使甘油滲透到精子體內(nèi)，達(dá)到滲透活性物質(zhì)平衡，使精子具有抗凍能力。處理方法是把精液放進(jìn)5℃冰箱內(nèi)平衡2～5小時(shí)。

　　(二)冷凍精液的方法 根據(jù)不同冷源和分裝方式，凍結(jié)方法有下列兩類： 1．干冰埋藏法 顆粒滴凍：是用干冰為冷源制作顆粒凍精的方法。在盛滿干冰的容器中，用模板在干冰表面上壓孔，孔徑為0.5厘米，深2～3厘米。用滴管把平衡好的精液按0．1或0．2毫升的量滴入干冰孔窩內(nèi)，再用干冰封埋2～4分鐘后移液氮或干冰內(nèi)貯存。 2．液氮熏蒸法 (1)顆粒滴凍 在裝液氮的容器上放一銅紗網(wǎng)，距液氮面1～3厘米預(yù)冷幾分鐘，把經(jīng)平衡處理的精液按定量均勻地滴在紗網(wǎng)上過2～4分鐘，待凍精顆粒變白時(shí)再收集到貯精瓶內(nèi)，移入液氯罐中保存。滴凍過程中，可用消毒鋁飯盒蓋替代銅紗網(wǎng)。 (2)細(xì)管、安瓿分裝　精液可采用顆粒滴凍的相同方法處理。

　　(三)解凍方法　細(xì)管、安瓿分裝的凍精，可以直接在35～40℃的溫水中解凍，只等細(xì)管或安瓿內(nèi)的精液融化一半時(shí)，便可以從溫水中取出來以備使用。解凍顆粒精液有干濕兩種方法： 1．濕法解凍 是在滅菌試管內(nèi)注入1毫升1．9％檸檬酸鈉解凍液，將試管在水浴中加熱至35～40℃，取出顆粒精液 投進(jìn)試管內(nèi)，搖動(dòng)融化以備使用。 2．干法解凍 是直接將顆粒凍精置于滅菌試管內(nèi)，然后在水浴中加熱至35～40℃解凍即可。冷凍精液解凍后立即進(jìn)行鏡檢，活力達(dá)到0．3以上的就可以用于輸精。要提高凍精的受胎率，一般采用1：1的低倍稀釋，40℃干法快速解凍，1億左右有效精子數(shù)的大量輸精和一個(gè)情期二次重復(fù)輸精等方法。

　　三，超數(shù)排卵與胚胎移植

　　(一)超數(shù)排卵 促卵泡素(FSH)能促使卵泡發(fā)育，促黃體素(LH)能引起排卵，使用有這些功能的促性腺激素類似物處理繁殖母羊，使其在未經(jīng)處理時(shí)每個(gè)情期中只排1～7個(gè)卵的基礎(chǔ)上增加排卵數(shù)量，這就是超數(shù)排卵技術(shù)，簡稱“超排”。超數(shù)排卵處理可使母羊在一個(gè)情期內(nèi)排出20個(gè)卵，個(gè)別母羊可高達(dá)50個(gè)卵。促使母羊超排的*時(shí)間是在發(fā)情周期的第12～13天，在羊頸靜脈注射促卵泡素(FSH)200～300國際單位，靜脈注射促黃體素(LH)100～150國際單位，可獲得超排效果。還可以使用促卵泡素(FSH)的類似替代物孕馬血清(PMSG)和 促黃體素(LH)的類似替代物絨毛膜促性腺激素(HCG)，同樣在母羊發(fā)情周期的第12～13天，根據(jù)體重大小皮下注射孕馬 血清(PMSG)600～1100國際單位，出現(xiàn)發(fā)情表現(xiàn)后再注射絨 毛膜促性腺激素(HCG)500～700國際單位。如果沒有孕馬血清的制成品，可采妊娠50～90天期間的孕馬全血注射，一般每毫升孕馬全血含有50～200國際單位，由此可以推算全血用量。超數(shù)排卵的目的在于輸精后能獲得較多的受精卵，將其移植即可“借腹懷胎”形成新的個(gè)體，因此超數(shù)排卵只是胚胎移植的環(huán)節(jié)之一。

　　(二)胚胎移植 1．胚胎移植的意義 從一頭母畜的輸卵管或子宮內(nèi)取出早期的胚胎(受精卵)移植到另一頭母畜的輸卵管或子宮內(nèi)，讓其“借腹懷胎”繼續(xù)生長發(fā)育的過程就是胚胎移植，簡稱“胚移”。提供胚胎的畜體稱為“供體”，接受胚胎的畜體稱為“受體”。結(jié)合超數(shù)排卵技術(shù)，胚移可以迅速繁殖優(yōu)良品種的后代，擴(kuò)大純種數(shù)量。胚移還可以擴(kuò)大繁殖具有特種經(jīng)濟(jì)價(jià)值的家畜，如卡拉庫爾羊羔皮經(jīng)濟(jì)價(jià)值很高，為此可通過胚移讓其他種類的母羊懷胎生產(chǎn)卡拉庫爾羔羊。還可以利用胚移技術(shù)將受精卵移植到家兔生殖道內(nèi)進(jìn)行長距離運(yùn)輸，然后再移植到母羊子宮內(nèi)，這樣可以減少胚胎損失，降低運(yùn)輸成本。2．胚胎移植的技術(shù)環(huán)節(jié)胚移的主要技術(shù)環(huán)節(jié)就是收集胚胎和移植胚胎。 (1)收集胚胎 配種后3～8天內(nèi)對(duì)供體母羊施行外科手術(shù)，在腹中線適當(dāng)部位切開腹壁取出輸卵管。從子宮角上端注射生理鹽水或若干等滲生理緩沖溶液(簡稱沖洗液)，并將沖洗液擠入子宮～輸卵管連接部，為此在輸卵管傘部插入直徑2．5毫米的塑料管，用鑷子固定輸卵管，將沖洗液沿子宮至輸卵管倒擠出來，用表面皿收集液體和胚胎。 (2)移植胚胎 接納胚胎的受體母羊應(yīng)和供體母羊一起做同期發(fā)情處理，使二者的發(fā)情時(shí)間相同或接近。移植胚胎的方法同樣是在受體腹中線適當(dāng)部位切開腹壁，找到排卵一側(cè)的卵巢，如黃體發(fā)育良好，將胚胎注射到同側(cè)子宮角上端或 輸卵管壺腹內(nèi)。目前，國外已可用非手術(shù)法進(jìn)行胚移，只需在供體母羊腹部切一小口，利用內(nèi)窺鏡從供體母羊體內(nèi)收集受精卵，然后移植到受體子宮即可。