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在天然的水域中,性腺發(fā)育成熟的細(xì)鱗鯧,在一定的水流速度、水溫和水位變化等生態(tài)環(huán)境條件的刺激下,親魚(yú)本身分泌促性腺激素,可以使卵巢或精巢完成整個(gè)成熟、排卵或排精過(guò)程。而在池塘中養(yǎng)殖的細(xì)鱗鯧親魚(yú),很難用人工模擬的生態(tài)環(huán)境條件使親魚(yú)自然繁殖。因此,生產(chǎn)上采用人工注射激素,促使雌親魚(yú)卵子成熟、排卵和產(chǎn)卵,促使雄親魚(yú)精子成熟并排精。催產(chǎn)技術(shù)水平直接影響催產(chǎn)率、受精率和孵化率。因此,必須嚴(yán)格按照操作規(guī)范和技術(shù)要求進(jìn)行人工催產(chǎn)。
早在1977年,Godinho等人用絨毛膜促性腺激素(HCG)催產(chǎn)細(xì)鱗鯧首獲成功,并進(jìn)行了早期胚胎的發(fā)育觀察;爾后,在1981年Castagnolli和Donaldson用鮭魚(yú)腦垂體精制品(SG-G100)、1985年Romagosa等人用鮭魚(yú)腦垂體粗制品(SPE)、1986年Bernardina等人用促黃體素生成素釋放激素類似物(LRH-A2)分別對(duì)細(xì)鱗鯧進(jìn)行催產(chǎn),均獲得了成功。
浙江省淡水水產(chǎn)研究所,于1999年7月在我國(guó)對(duì)細(xì)鱗鯧進(jìn)行人工繁殖,首次獲得了成功。
(一)親魚(yú)的選擇
為了確保催產(chǎn)成功,必須對(duì)雌、雄親魚(yú)的成熟度進(jìn)行選擇,只有成熟的親魚(yú),在適宜水溫、水位、催產(chǎn)劑和催產(chǎn)技術(shù)等條件;才能夠正常排卵或排精、人工授精。一般可根據(jù)親魚(yú)的外表或與挖卵觀察相結(jié)合的方祛來(lái)鑒別親魚(yú)成熟度。
1.外形鑒別 細(xì)鱗鯧在性成熟之前;很難分辨雌雄。達(dá)到性成熟時(shí),雌魚(yú)個(gè)體較大,腹部膨大,后腹部柔軟而富有彈性,腹部?jī)蓚?cè)卵巢輪廓明顯,生殖乳突大,呈紫紅色。這樣的雌魚(yú),符合催產(chǎn)條件。如果前腹部飽滿,后腹部小且不柔軟的雌魚(yú),還不成熟。腹部過(guò)于柔軟松馳的雌親魚(yú),則為卵巢被吸收退化的親魚(yú);性成熟的雄親魚(yú),個(gè)體相對(duì)較小,腹部狹窄,生殖器呈三角形凹入,若輕壓腹部有較多乳白色的精液流出,則說(shuō)明魚(yú)體成熟度好,可進(jìn)行催產(chǎn)。如輕壓雄親魚(yú)后腹部,擠不出精液或擠出少量精液且精液入水后成細(xì)線狀不散開(kāi),這說(shuō)明雄親魚(yú)尚未完全成熟,不能選用。
2.挖卵觀察 為了更準(zhǔn)確地鑒別雌性親魚(yú)的成熟度,還可采用挖卵器取卵檢查。挖卵器可用塑料管、銅桿或鴨鵝毛管制成,在前部為挖取槽長(zhǎng)1.5厘米、寬為0.3厘米的小孔。用挖卵器輕輕插入雌親魚(yú)生殖孔,當(dāng)挖卵器順利地插入魚(yú)體生殖孔23厘米后,慢慢轉(zhuǎn)動(dòng)1周,再輕輕抽出挖卵器,即可取出卵粒。若生殖孔太緊,表明雌親魚(yú)成熟度差,此時(shí)不應(yīng)再用力插入。卵粒用顯微鏡檢查,卵子為翠綠色,卵粒大小均一、流動(dòng)自如,卵徑為939.0微米的卵,受精率高。這類的卵子,在排卵之前卵徑會(huì)增大到1001.6微米。
細(xì)鱗鯧親魚(yú)的繁殖力與年齡成正比,3齡的細(xì)鱗鯧雌親魚(yú),絕對(duì)懷卵量為297308粒/尾,4齡的細(xì)鱗鯧雌親魚(yú),絕對(duì)懷卵量為377643粒/尾。
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在催產(chǎn)之前,有計(jì)劃地搭配雌雄親魚(yú)的數(shù)量,即為配組。為了有利于細(xì)鱗鯧親魚(yú)產(chǎn)卵和受精,生產(chǎn)上一般采用雄親魚(yú)的數(shù)量多于雌親魚(yú),雌雄親魚(yú)之比為1:2。配組時(shí)要注意:參加同批催產(chǎn)雌雄親魚(yú)的個(gè)體大小,應(yīng)盡可能相近。
?。ㄈ┐弋a(chǎn)劑及注射量
目前常用的催產(chǎn)劑有:腦垂體(PG)、絨毛膜促性腺激素(HCG)、促黃體素生成素釋放激素類似物(LRH-A2)、地歐酮(DOM)和混合激素等。
催產(chǎn)劑的種類和催產(chǎn)劑的有效劑量,要根據(jù)親魚(yú)的數(shù)量、成熟度、性別和個(gè)體大小,以及催產(chǎn)時(shí)間、水溫等情況進(jìn)行選用。在催產(chǎn)早期或水溫低或親魚(yú)成熟度差的情況下,催產(chǎn)劑量應(yīng)適當(dāng)增加;反之,則應(yīng)適當(dāng)減少。已有資料證明,采用兩針注射法,兩針間隔6小時(shí)與12小時(shí),具有相同的催熟效果。這表明催熟率由第一針?biāo)鶝Q定,第二針對(duì)誘導(dǎo)排卵非常有效。
?。ㄋ模┐弋a(chǎn)方法
細(xì)鱗鯧常用的催產(chǎn)方法是:先注射少量催產(chǎn)劑進(jìn)行催熟,然后間隔一段時(shí)間后,再注射催產(chǎn)劑進(jìn)行催產(chǎn)。即:通常所說(shuō)的兩次注射法。
1.催產(chǎn)劑的準(zhǔn)備 腦垂體(PG)用干凈的研缽將其研成粉末,研的越細(xì)越好;然后用生理鹽水配制成懸濁液。絨毛膜促性腺激素(HCG)及促黃體素生產(chǎn)素釋放激素類似物(LRH-A2)用生理鹽水溶解備用。一般按催產(chǎn)親魚(yú)的體重,計(jì)算出催產(chǎn)劑的總用量,再增加5%10%的補(bǔ)充配制和作為注射時(shí)的損耗。注射的生理鹽水用量,一般每尾親魚(yú)每次注射2毫升,不宜過(guò)濃或過(guò)稀,以免影響催產(chǎn)效果。
2.注射方法 體腔注射和肌肉注釋均可,生產(chǎn)上多采用體腔注射。注射前要先將注射器、針頭用水煮開(kāi)消毒。體腔消毒時(shí),一般在胸鰭或腹鰭基部無(wú)磷凹入部位進(jìn)針,深度為11.5厘米,注意不能刺傷心臟,將注射液慢慢地注入。肌肉注射部位是在側(cè)線與背鰭之間,注射時(shí)要用針頭挑起鱗片,并順著鱗片向前刺入肌肉中,或從背鰭基部后方無(wú)鱗處與鰭條平行進(jìn)針,深度為1.52厘米。兩針針距為814小時(shí)。
?。ㄎ澹┬?yīng)時(shí)間與發(fā)情
從末次注射催產(chǎn)劑到發(fā)情產(chǎn)卵的時(shí)距,稱為效應(yīng)時(shí)間。效應(yīng)時(shí)間的長(zhǎng)短,與水溫、催產(chǎn)劑種類、注射次數(shù)、劑量和親魚(yú)性腺成熟度等密切相關(guān),尤其是與水溫、催產(chǎn)劑種類和劑量關(guān)系*。一般水溫高,效應(yīng)時(shí)間短;反之,則長(zhǎng)。注射腦垂體,比注射其他催產(chǎn)劑效應(yīng)要快。細(xì)鱗鯧親魚(yú)催產(chǎn)后,放入水溫為2330℃的微流水催產(chǎn)池中,效應(yīng)時(shí)間為714小時(shí),在其*繁殖水溫2528℃時(shí),效應(yīng)時(shí)間為810小時(shí)。
親魚(yú)注射催產(chǎn)劑入池后,先是各自漫游,到效應(yīng)時(shí)間后,雄親魚(yú)開(kāi)始追逐雌親魚(yú),即為發(fā)情。到發(fā)情高潮時(shí),親魚(yú)在水中興奮急游,激水成浪花,或拔水出聲。沖水對(duì)親魚(yú)發(fā)情有一定的刺激作用,一般在發(fā)情前2小時(shí),加大產(chǎn)卵池中水的流速,促進(jìn)親魚(yú)追逐、產(chǎn)卵或排精等生殖活動(dòng)。發(fā)情后和產(chǎn)卵時(shí),給以微流水。
(六)自然產(chǎn)卵與人工授精
1.自然產(chǎn)卵 發(fā)情的細(xì)鱗鯧親魚(yú)達(dá)到高度興奮時(shí),雌雄親魚(yú)急速游動(dòng),身體緊貼或扭在一起,最后雌、雄親魚(yú)腹部緊貼,胸鰭張開(kāi)靠攏,尾柄互相勾緊,此時(shí),雌親魚(yú)產(chǎn)卵,雄親魚(yú)射精,并借鰭以攪動(dòng)水流。使卵、精充分接觸而受精。
2.人工授精 由人工采卵、采精、授精,以獲得受精卵的方法稱為人工授精。為提高人工授精率,首先必須準(zhǔn)備判斷親魚(yú)發(fā)情產(chǎn)卵的時(shí)間,適時(shí)捕魚(yú)采卵、采精;其次,進(jìn)行人工授精時(shí),要求掌握比較熟練的操作技術(shù)。一般人工授精的方法有干法、半干法和濕法3種,其中干法授精最為常用。具體做法是:
?。?)采卵 在親魚(yú)催產(chǎn)后,雌、雄親魚(yú)追逐激烈時(shí),或達(dá)到效應(yīng)時(shí)間雌、雄親魚(yú)仍無(wú)追逐現(xiàn)象時(shí),均需及時(shí)檢查雌親魚(yú)是否產(chǎn)卵。檢查可在水中進(jìn)行,將魚(yú)體腹部朝上,用手輕壓腹部,若有較多的卵子從生殖孔產(chǎn)出,即可進(jìn)行采卵。如產(chǎn)卵不多時(shí),可將親魚(yú)暫養(yǎng)約半小時(shí)后再進(jìn)行采卵。
采集魚(yú)卵的顏色,如呈青灰色,游離,大小均勻,卵粒飽滿、圓整,吸水快,膨脹均勻且脹足,卵巢液呈黏稠狀、量適中,此為優(yōu)質(zhì)卵,受精率高;如卵粒呈暗淡色,帶“白卵”,卵球大小不均勻,彈性差或無(wú)彈性,卵膜易破裂,吸水慢且不完全,卵巢液少或多似水、無(wú)黏性,此為成熟不良的卵或?yàn)檫^(guò)熟的卵,受精率低或不受精。
?。?)采精 成熟雄親魚(yú)的精液,一般隨時(shí)均可采集。精液如呈乳白色、黏稠狀,則為優(yōu)質(zhì)精液;如精液較稀、略帶黃色,則一般為過(guò)熟,質(zhì)量不佳。精液的采集,一般用510毫升的針筒(不帶針頭)吸入人工擠出的精液儲(chǔ)存?zhèn)溆?。精液也可預(yù)先采集,放入保存液中。保存液配方為葡萄糖2.9克、檸檬酸鈉1.0克、碳酸氫鈉0.2克、氯化鉀0.03克、磺胺0.3克,另加蒸餾水100毫升,進(jìn)行制備。保存時(shí),將新鮮的精液,加入3倍保存液進(jìn)行稀釋,再逐步降溫至3℃,放入冰箱或保溫瓶?jī)?nèi)保存?zhèn)溆?。一般精子可成?015天,使用時(shí)待溫度上升后即可用于人工授精。
?。?)干法授精 將成熟排卵的雌親魚(yú)及成熟雄親魚(yú)起捕,用干毛巾抹去親魚(yú)魚(yú)體及泄殖孔部位的水分,將雌親魚(yú)的卵子擠入擦干的白搪瓷盆中,同時(shí)將雄親魚(yú)對(duì)著容器擠入精液或?qū)⑻崆安杉玫木鹤⑷肫渲校⒓从糜鹈蚴志鶆驍嚢鑜2分鐘,加入少量生理鹽水后再輕輕攪拌,受精過(guò)程便在此時(shí)進(jìn)行。在人工授精過(guò)程中,切忌陽(yáng)光直射,以免紫外線殺死精子,影響受精率。
三、孵化
受精卵在適宜的環(huán)境條件下,經(jīng)過(guò)一系列的變化,最后破膜而出,變成魚(yú)苗,這就是胚胎發(fā)育過(guò)程。生產(chǎn)上所講的孵化,實(shí)際上包括了魚(yú)苗下塘前的整個(gè)時(shí)期。細(xì)鱗鯧的受精卵孵化,在流水中進(jìn)行。
(一)胚胎發(fā)育
受精卵的孵化,當(dāng)水溫為2528℃時(shí),破膜時(shí)間為1620小時(shí);當(dāng)水溫為29℃時(shí),破膜時(shí)間為13小時(shí)。剛出膜的魚(yú)的長(zhǎng)度為56毫米。
1.受精卵 細(xì)鱗鯧卵粒呈青灰色,無(wú)黏性,卵膜薄而透明,屬漂浮性魚(yú)卵。剛產(chǎn)出的卵粒,直徑為1.11.2毫米。每克重的卵,含卵9001000粒。受精卵吸水30分鐘后,膨脹到56毫米。
2.胚胎發(fā)育 浙江省淡水水產(chǎn)研究所巴西新品種課題組科研人員,1999年對(duì)細(xì)鱗鯧的胚胎發(fā)育進(jìn)行了初步觀察與測(cè)量。
孵化出膜的魚(yú)苗,再經(jīng)過(guò)45天的孵化,魚(yú)苗的腰點(diǎn)明顯,卵黃囊即將被吸收完畢,消化道貫通,此時(shí)魚(yú)苗即可準(zhǔn)備下塘,進(jìn)入魚(yú)苗培育階段。
?。ǘ┓趸O(shè)備
細(xì)鱗鯧人工繁殖常用的孵化設(shè)備有:孵化缸、孵化桶和孵化環(huán)道等。
1.孵化桶(缸) 孵化桶一般由鍍鋅鐵皮焊接而成,呈漏斗狀,由桶體、過(guò)濾罩、支架和進(jìn)出水管等部分組成。水經(jīng)缸底流入把卵沖起,使卵不停地上下翻滾,呈懸浮狀態(tài),孵化水則由過(guò)濾罩過(guò)濾流出,通過(guò)出水口流走。孵化缸一般用水缸改制而成,進(jìn)水則通過(guò)缸中間的導(dǎo)管,由導(dǎo)管上部進(jìn)水至底部泛起,使卵不停翻滾,水再經(jīng)濾罩流出。每立方米水體可放受精卵80萬(wàn)120萬(wàn)粒。
2.孵化環(huán)道 適宜大規(guī)模生產(chǎn)的大型孵化設(shè)備,多為磚砌水泥砂漿抹面結(jié)構(gòu)的孵化環(huán)道,小型的也有用塑料或白鐵皮制成,一般環(huán)道為23環(huán),也有單環(huán)或3環(huán)以上的。進(jìn)水管設(shè)在環(huán)道底部,水在環(huán)道中環(huán)流,然后以內(nèi)溢或外溢的方式經(jīng)排水管排出,進(jìn)排水各成系統(tǒng),均由設(shè)在環(huán)道外的閘閥控制。為了防止水流出現(xiàn)死角,放卵密度不宜過(guò)大,一般每立方米水體以放卵100萬(wàn)120萬(wàn)粒為宜。
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1.選擇孵化用水 在選擇孵化用水時(shí),要求水質(zhì)清新,無(wú)毒、無(wú)污染、無(wú)敵害生物,含氧量在5毫克/升以上,酸堿度適中,pH6.57.5。
2.預(yù)防敵害生物 由于初出膜的魚(yú)苗十分嬌嫩,器官發(fā)育不全,對(duì)外界不良環(huán)境的抵抗能力差,易被生物敵害殘殺,故進(jìn)水時(shí)應(yīng)先用120目的尼龍篩絹過(guò)濾,防止水中的劍水蚤、水蚤、水生昆蟲(chóng)的成蟲(chóng)和幼蟲(chóng)對(duì)魚(yú)卵、魚(yú)苗造成危害。
3.水溫要求 細(xì)鱗鯧受精卵孵化在不同的水溫條件下,其胚胎發(fā)育的速度也不同。在一定的水溫范圍內(nèi),隨著水溫的升高,而孵化時(shí)間將縮短。當(dāng)孵化水溫低于或高于所需水溫或水溫驟變,都會(huì)造成胚胎發(fā)育停滯,或畸形胚胎增多,影響孵化出苗率。細(xì)鱗鯧受精卵的最適孵化水溫為2528℃。
4.溶解氧 胚胎發(fā)育需要氧氣供應(yīng),且隨著發(fā)育進(jìn)程需氧量逐漸增加。在生產(chǎn)上要求孵化用水的含氧量不低于5毫克/升。同時(shí)還要求保證卵或苗不堆積,否則即使在高溶氧量的水中也會(huì)出現(xiàn)缺氧窒息而死亡。
5.流水 流水孵化時(shí),流速大小決定水中氧氣含量的多少和受精卵的分布密度。流速過(guò)緩,卵會(huì)沉積窒息死亡。過(guò)快,會(huì)使卵膜過(guò)早破裂,胚胎死亡。所以,在孵化過(guò)程中,水流調(diào)控是一項(xiàng)非常重要的工作。水的流速可根據(jù)水的交換情況進(jìn)行調(diào)節(jié),一般以15分鐘交換一次為快,以3040分鐘交換一次為慢。放卵時(shí),要求卵能隨水逐流,保證胚胎對(duì)氧氣的需要。隨著胚胎的發(fā)育,胚胎對(duì)氧氣的需要量也將越來(lái)越大,必須逐步增大流速。出膜時(shí),則應(yīng)適當(dāng)減緩流速,以提高孵化酶的濃度。出膜后魚(yú)苗活力弱,大部分時(shí)間在水體下層,為避免魚(yú)苗堆積水底而窒息死亡,流速要適當(dāng)增加,以利于魚(yú)苗的漂浮和均勻分布。
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1.受精率 一般在胚胎發(fā)育至原腸中、晚期計(jì)算受精率。隨機(jī)抽取魚(yú)卵200500粒,放于培養(yǎng)皿中,數(shù)出總卵數(shù)和正常的受精卵數(shù)(重復(fù)計(jì)數(shù)幾次),計(jì)算出正常發(fā)育的好卵數(shù)占總卵數(shù)的百分比,即為魚(yú)卵的受精率。
受精率=(受精卵數(shù)÷總卵數(shù))×100%
2.孵化率 為了提高孵化管理水平,必須計(jì)算孵化率。
孵化率=(孵出魚(yú)苗數(shù)÷受精卵總數(shù))×l00%
3.出苗率 生產(chǎn)上真正的孵化率難以計(jì)算,生產(chǎn)上主要是計(jì)算出苗率。出苗率即出苗數(shù)占受精卵總數(shù)的百分比。
出苗率=(出苗數(shù)÷受精卵總數(shù))×100%
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